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細胞培養の基礎知識シリーズ 全4回

Corning マトリゲル基底膜マトリックスの取り扱い

本ページの情報は、Corning マトリゲル基底膜マトリックス よくある質問と回答およびCorning Matrigel Matrix(CLS-047)のCorning Matrigel Matrixに関するQ&Aの内容に加筆・編集したものです。

• Corning マトリゲル基底膜マトリックスを扱う場合には、ピペットチップおよびチューブを冷却する必要がありますか?

  はい。Corning マトリゲル基底膜マトリックスは10℃以上でゲル化し始めるため、Corning マトリゲル基底膜マトリックスを扱う場合には、あらかじめ冷却しておいたピペット、チップ、チューブを使用することをお勧めします。

   

• Corning マトリゲル基底膜マトリックスはどのように希釈すればよいのですか?

  Corning マトリゲル基底膜マトリックスは、氷冷した無血清培地あるいはリン酸緩衝生理食塩水（PBS）、pH 7.4で希釈します。

   

• Corning マトリゲル基底膜マトリックスのピペッティングはどのようにすればよいですか?

  正確なピペッティングのためには、ポジティブディスプレイスメント方式のピペットあるいはシリンジを使ってください。Corning マトリゲル基底膜マトリックスは、温かいピペット・シリンジの内外表面に付着することがあるので、冷却したピペット・シリンジの使用を強くお勧めします。

  ◗分注：チップがバイアルの底につかないようにしてください。ピペットやチップで空気を吹き出さないでください。

  ◗ピペット：5 mLを分注する際には、目盛りの6 mLから1 mLまでを分注します。

  ◗ポジティブディスプレイスメント方式のピペット：吸引時は2段目まで押し込みます。排出時はピペット1段目まで押し込みます。

   

• Corning マトリゲル基底膜マトリックスが37 ℃でゲル化し、4 ℃で液状化するのはなぜですか?

  Corning マトリゲル基底膜マトリックスは、EHSマウス肉腫から抽出された基底膜を再構成したものです。腫瘍から抽出された時は、ラミニン、コラーゲンIV、エンタクチン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、EHS腫瘍に通常含まれる増殖因子が含まれています。これらのタンパク質は、ラミニン、コラーゲンIV、およびヘパリン結合タンパク質と相互作用する複数のドメインを持ち、Corning マトリゲル基底膜マトリックスの構造形成に寄与しています。22 ℃から37 ℃では、結合の形成に十分なエネルギーがあり、Corning マトリゲル基底膜マトリックスはゲル化します。しかし、4 ℃では、結合の形成に十分なエネルギーがないため、マトリックス構造が作れず、Corning マトリゲル基底膜マトリックスは液化して溶液になります。

   

• Corning マトリゲル基底膜マトリックスのゲル化に必要な最低濃度はどれくらいですか?

  最適なタンパク質濃度はアプリケーションによって異なるため、アプリケーションごとに最適なタンパク質濃度範囲を決める必要があります。Corning マトリゲル基底膜マトリックスは3 mg/mLまでの希釈であればゲルを形成します。希釈するときに、連続希釈で目的の濃度を得るのではなく、かならず目的とする特定の濃度（mg/mL）に希釈してください。in vivoアプリケーションでは、ゲル化が不完全にならないように、Corning マトリゲル基底膜マトリックスを最終濃度 4 mg/mL以下に希釈しないでください。

  ※薄層コートを除く。

  ※浸潤アッセイ用のコーティングについてはコーティング プロトコールのページをご参照ください。

   

• 細胞が接着しません。ゲルがプレートからはがれてしまいます。どこに問題があったのでしょうか?

  Corning マトリゲル基底膜マトリックスを非常に低濃度（例 3 mg/mL未満）に希釈した場合、形成されるゲルは弱く壊れやすく、細胞培養用プラスチックからはがれやすくなります。細胞播種密度が高すぎないかを確認します。また、細胞の播種密度の最適化も有効です。播種密度が高いとゲルが壊れる可能性があります。

   

• 融解後、希釈前のCorning マトリゲル基底膜マトリックスの沈殿物はどのように処理したらよいですか?

  小分けする前に、4℃、低速で遠心して沈殿物をペレットにします。