若发现细胞停止生长或培养细胞不贴壁,往往会感到无比沮丧。细胞生长迟缓和培养物性状不稳定会造成项目延期,令团队士气受挫,研究人员不得不想方设法找出问题的根源并加以解决。
这些问题有时无法直截了当地给出解决方案。细胞培养技术十分复杂,需要花时间分解过程并排查问题。最常见的问题通常包括生长模式异常或细胞贴壁呈点状、不均匀或不稳定。其它问题包括生长速度缓慢或突然变化,或者出现无法解释的结果。
上述问题往往与培养方法、孵育和培养基有关。下面将探讨其中的一些痛点以及如何通过遵循操作规范防患于未然。
若发现细胞停止生长或培养细胞不贴壁,往往会感到无比沮丧。细胞生长迟缓和培养物性状不稳定会造成项目延期,令团队士气受挫,研究人员不得不想方设法找出问题的根源并加以解决。
这些问题有时无法直截了当地给出解决方案。细胞培养技术十分复杂,需要花时间分解过程并排查问题。最常见的问题通常包括生长模式异常或细胞贴壁呈点状、不均匀或不稳定。其它问题包括生长速度缓慢或突然变化,或者出现无法解释的结果。
上述问题往往与培养方法、孵育和培养基有关。下面将探讨其中的一些痛点以及如何通过遵循操作规范防患于未然。
当细胞培养物出现问题时,首先需要评估的是操作方法。例如,饲养培养物时可能会使其受到污染,这是一个严重却常见的问题。混合和移液不当也会带来问题:
当观察到细胞贴壁或生长不均匀或模式异常时,通常意味着有地方出了问题。为了更好地进行检测,可使用戊二醛或乙醇固定培养物样本,然后再进行染色并观察。
尽管使用培养箱的目的是为了最大程度地降低环境因素的影响 (如温度变化),但仍有许多变量会影响生长速率和培养物的活性:
此外,还应采取其它环境预防措施,以确保细胞正常生长,如使培养箱保持在水平状态、不含有毒杂质等。
培养基的问题有时并非显而易见,许多因素都会影响培养基的功能,如试剂质量不佳、缓冲液不足和过滤不充分,甚至是荧光毒性。
除了确保使用适合研究的配方并购买优质产品外,检测培养基功能的最佳方式就是进行实验。将有问题的培养基与另一家生产商的同一种培养基进行比较。如果使用新培养基也产生同样结果,则可能是方法或孵育问题。
采用不恰当的技术和处理方法会影响活细胞培养。尽管逐个排查变量十分耗时费事,但往往能够更好地发现问题并找出原因。
当细胞出现异常生长时,不妨把它们当成其他科研难题来攻克:大胆假设、小心检验并分析。用不了多久,您就能掌握让宝贵的细胞健康生长的诀窍,研究工作也会自此步入正轨。
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