O seguinte artigo foi originalmente publicado em 27 de setembro de 2022 no Biocompare.
Principais Dicas para Preparação Interna de Meios
Embora os meios líquidos sejam amplamente utilizados para o cultivo de células e a cultura em batelada alimentada, nem sempre estão disponíveis para todos os tipos de células e aplicações. Nessas situações, é preferida a preparação interna de meios a partir de estoques em pó - uma abordagem que oferece muitas vantagens. Aqui, explicamos o que está envolvido durante a preparação interna de meios e compartilhamos sugestões das melhores práticas.
Quais são as vantagens de preparar o meio internamente?
Existem várias razões pelas quais os pesquisadores devem considerar a preparação de meios internamente. Com problemas na cadeia de suprimentos global, que levam a prazos de entrega mais longos, preparar o meio a partir de estoques em pó pode significar ter um experimento concluído mais rapidamente. Além disso, o preço por litro geralmente é mais baixo com os pós, embora os custos de preparação e filtragem ainda devam ser considerados. Outra vantagem importante da preparação interna é que ela permite que o meio seja preparado sem os suplementos que possam estar incluídos na versão líquida do produto. Por fim, uma abordagem de ‘faça você mesmo’ pode ajudar a contornar a curta vida útil de muitos produtos líquidos, além de liberar espaço de armazenamento em geladeiras e freezers.
O que está envolvido na preparação de meios a partir de estoques em pó?
A preparação de meios a partir de estoques em pó é relativamente simples. Primeiro, o pó é pesado e adicionado ao diluente - geralmente, água grau cultivo celular. A quantidade de diluente usado deve ser cerca de 70-80% do volume final e deve ser misturado em uma placa de agitação enquanto o pó é adicionado. Dependendo da formulação, pode ser necessário ajustar o pH (geralmente usando NaOH ou HCl 1M). Em seguida, quaisquer suplementos (por exemplo, agentes de tamponamento como bicarbonato de sódio ou aminoácidos como L-glutamina) podem ser adicionados antes de completar com mais diluente até atingir a volume final. Uma vez que a solução esteja totalmente misturada e o pH final tenha sido verificado, o meio deve ser filtrado utilizando filtro pré-esterilizado (geralmente recomenda-se um tamanho de poro de 0,22 µm) para remover qualquer bactéria. É importante ressaltar que esta última etapa deve ser realizada em uma cabine de segurança biológica para manter a esterilidade.
Melhores práticas para a preparação interna de meios
Para garantir que as preparações internas de meios tenham a mesma alta qualidade dos produtos líquidos prontos para uso, os pesquisadores devem seguir algumas recomendações de melhores práticas. Isso inclui a compra de estoques em pó de um fornecedor confiável - que possa fornecer um certificado de análise detalhado e instruções abrangentes para reidratação - e confirmar que os aditivos são certificados como sendo de grau cultivo celular.
Ser consistente na forma como o produto é manipulado também é importante. Mesmo variações aparentemente triviais entre diferentes preparações de meios podem afetar o crescimento celular e distorcer os resultados dos experimentos. O pH deve sempre estar dentro da faixa especificada pelo fabricante para evitar influenciar processos biológicos, como o metabolismo e a sinalização celular. Da mesma forma, a osmolaridade (a concentração total de solutos em um volume específico) deve estar dentro de limites pré-definidos para garantir que o pó esteja completamente solubilizado e homogêneo, e evitar que as células se expandam ou contraiam.
A maneira que a solução resultante é filtrada também deve ser cuidadosamente considerada. Quando a etapa de filtração é alcançada, o uso da técnica asséptica correta é essencial, pois a filtração representa a etapa final do processo antes que o meio seja adicionado às células vivas. Aqui, é fundamental confirmar que a pressão de vácuo é adequada para a unidade de filtração escolhida. Se for muito alta, há o risco de esmagar o frasco ou rasgar o filtro, o que poderia levar à contaminação indesejada. As unidades de filtro devem vir com comprovação de um controle de qualidade robusto, incluindo confirmação de baixa ligação de proteínas (para garantir que os componentes do meio não sejam perdidos devido à captura no filtro) e verificação de que os frascos fornecidos para armazenamento não liberarão substâncias que comprometam as taxas de crescimento celular ao longo do tempo.
Por fim, assim que o meio estiver pronto para uso, ele deve ser claramente rotulado com informações, como o nome do meio, a concentração de quaisquer aditivos e a data de preparação. Em seguida, deve ser armazenado de acordo com as instruções do fabricante e, se não for utilizado antes do final da vida útil indicada, deve ser descartado corretamente.
A Corning Life Sciences oferece uma ampla variedade de formulações de meios em pó, aditivos grau cultivo celular, unidades de filtração estéreis e muito mais.