原因は特定できませんが、常に起こりうる染色ムラです。固定・染色の各工程で、よく液切りをしてから次のステップへ進む、時間をなるべく揃える、よく乾燥させるという点に注意して作業してみてください。それでもムラはある程度起こります。最後に水洗いをしている場合は、洗った後の水分を十分乾かしてから観察してください。水分が残っていると、色素がにじんで、細胞が見えにくくなります。

最終的に、顕微鏡で細胞が見える状態であれば、色調に濃い薄いの差があっても問題はありません。

Diff-Quickを使用した例では、キシレン系の封入剤などが使用可能です。蛍光染色用の封入剤は避けてください。使用する固定染色法により、下記の封入剤でも色落ちを起こす可能性がありますので、念のため事前にご検討ください。

 

使用可能なことが確認できた封入剤

VectaMount AQ Aqueous Mounting Medium（H-5501） VectaMount Permanent Mounting Medium（H-5000） Organo (Limonene) Mounting Medium（AR-6504-01） マルチマウント220　100mL（FM22001） マルチマウント480　100mL（FM48001） MGK-S　100mL（FK00100）

 

細胞の形態により見え方が異なります。脱水固定すると異なる形態をとることがあります。メンブレンのポア（穴）は、丸や卵型あるいは屈曲して見えます。

 

ヘマトキシリン/エオシン（H＆E）やライト染色など、核と細胞質を染め分ける染色法を推奨しています。市販のキットには、Diff-Quick（シスメックス カタログ番号 16920）やHemacolor® Stain Set（Merck カタログ番号 111674）があります。