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細胞培養の基礎知識シリーズ 全4回

Corning マトリゲル基底膜マトリックス中の細胞の固定

本ページの情報は、Corning マトリゲル基底膜マトリックス よくある質問と回答およびCorning Matrigel Matrix(CLS-047)のCorning Matrigel Matrixに関するQ&Aの内容に加筆・編集したものです。

• 免疫組織化学的実験や免疫蛍光実験を行なうために切片標本の作製が必要な場合、Corning マトリゲル基底膜マトリックス中の細胞をどのように固定すればよいですか?また、固定後にCorningマトリゲル基底膜マトリックスの脱重合を防ぐにはどうすればよいでしょうか?

  Corning マトリゲル基底膜マトリックス中で培養した細胞を、2% パラホルムアルデヒドで固定することをお勧めします。固定後にCorning マトリゲル基底膜マトリックスが脱重合する場合もまれにあります。Corning マトリゲル基底膜マトリックスに1%のグルタルアルデヒドを加えると脱重合を防ぐことができます。

  グルタルアルデヒドは、電子顕微鏡で使用する固定剤であり、バックグラウンド自家蛍光が大きくなる傾向があります。固定化後に、NaBH₄を使用したクエンチングステップを加えることをお勧めします（免疫蛍光アッセイのため）。NaBH₄を使用すると気泡が発生するので、気泡の発生を最小限にするために、このステップはベンチ上で揺らさないようにしてください。脱重合を最小限にするためにより低濃度（0.1%から0.5%）のグルタルアルデヒドを試してみてもいいでしょう。グルタルアルデヒドの使用量が少なければバックグラウンド蛍光も少なくなります。